初始传染菌检验步骤验证的主张是确保初始传染菌检验步骤的合用性，从而保障检验了局的正确性。初始传染菌的数量能够反映出车间环境卫生的清洁度，与产品灭菌工艺、制品热原及内毒素有直接关系，故而要对其检测步骤进行验证，确认其有效性及检测正确性，从而优化产品灭菌工艺及节造产品热原及内毒素，确保产品的安全性。
初始传染菌也称初始生物负载（bioburden）指产品或无菌樊篱系统表表或内部的活微生物数量。分歧国度对分歧产品的生物负载有分歧的要求。
初始传染菌查抄时造就基的选择，医疗器械产品初始传染菌中造就基合用性查抄菌种传代数不要超过5代，菌各种类目前重要有5种：
大肠埃希菌 CMCC(B) 44 102
金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003
枯草芽孢杆菌 CMCC(B) 63 501
白色想珠菌CMCC(F) 98 001
黑曲霉菌 CMCC(F) 98 003
获取菌种的步骤：可从药检所采购自行造就稀释，它的弊端是操作繁琐，工作量大，菌数不正确。所以目前大无数企业城市选择贸易化的造就基活络度批示剂，利益是方便，能够在5min之内实现操作，并且菌数正确。重要步骤是将批示剂进行溶化混匀，取100ul接种，而后造就，所以说操作轻便，菌量正确。
接种数量50-100CFU，分歧的造就基接种的微生物种类分歧而有所分歧。供试品对照组造备：取造备好的供试液100ml， 以稀释液包办菌液同试验组操作。
阴性对照组为确认试验前提是否切合要求所进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌成长。如阴性对照有菌成长，应进行误差调查。
样品份额（SIP)，倒佧个样品不成能全数用于无菌查抄时，可用样品的其中一部门用于无菌查抄。
若不知路产品在微生物的散布，凭据资料组成的比例来随机选择SIP。
若知路产品上的微生物是均匀散布的，则SIP能够从产品的肆意部门选择。
若知路产品上的微生物散布但散布又不均匀，则SIP能够选择灭菌过程中最难灭菌的部位，或凭据资料组成的比例来随机选择SIP。应全力尽快将试验样品移至尝试室。若是必须推迟转送，在试验样品的保留前提应能预防微生物的迷失或扭转。应划定贮存最长功夫。干燥能成为微生物数量显著削减的原因，所以在选择贮存前提和贮存功夫时应加以思考。
计数步骤合用性试验中，选取平皿法或薄膜过滤法时，分为四个组，试验组、菌液组、供试品对照组、洗脱液对照组。
验证试验应进行3次独立的平行试验，并别离推算各试验菌的每次试验回收率。试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5～2 领域内。阴性对照试验应无菌成长。
测定值
建改系数验证，建改系数、回收率用于赔偿无法从产品或造就基中齐全去除微生物的数值。对某一特定的技术从产品上移除或造就微生物的能力的测定值。
建改系数=1/回收率。
回收率=（洗脱一次得到的微生物数量/ 接种的微生物数量）×100%
回收率=（洗脱一次得到的微生物数量/ 洗脱N得到的微生物总数）×100%
步骤的回收率≥ 50%（0.5），药典要求≥70%，应评估产品理化个性、物理的处置步骤对微生物的影响，在3次独立的平行试验中，回收率均应大于70%，则证明步骤有效，若发现回收率低于70%，则应排除滋扰，沉新验证，或选择回收率靠近要求的步骤和试验前提进行试验。
浸提液：0.9%无菌氯化钠溶液，取至少三个样品，向单个样品中参与适量浸提液，充分震摇后网络于已灭菌容器中，即得第一次洗脱液。同法洗脱第二次、第三次、第四次。
选取盛开式薄膜过滤法，每张滤膜过滤适量供试液，用适量浸提介质冲刷后取出滤膜，菌面朝上贴于造就基上，每个样品别离接种于胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基各1个。另取浸提介100mL 同法操作，作为阴性对照。以上两种造就基别离于 35℃和 25℃造就造就5天。
在计数时，分离到以前未遇到过的微生物，则应对其特点进行钻研，并对其在出产过程，蕴含灭菌过程的潜在影响加以思考和纪录存档。
初始传染菌计数了局应切合尺度划定的限值。应选取用统计学分析的一些了局，如minitab、JMP，其利益为能够发现被随机误差和已知的周期性颠簸，如季节变换所覆盖的一个细菌传染逐级向上的趋向。通常微生物的数值在一段功夫都维持在一个不变的水平，而后很短功夫内出现一个显著的尖峰。这个尖峰的呈显斓率应该被沉点监测，看其频率的变动情况以及是否切合影响初始传染。
误差与调换节造，在确认过程中如有不切合律例尺度或检验的情况产生，尝试员应分析原因，找出原因，进行纠正或改进以达到要求，不然步骤不能投入使用。验证执行中若有对已核准既定规划等调换，以及验证实现后决定对验证对象进行必要调换的，必须报上级辅导。必要时对可能影响产品质量、安全性或有效性的重要调换进行评估，确定是否必要调换后沉新验证。
参考资料：
《医疗器械出产质量治理规范》
GB/T 19973.1-2015《医疗器械的灭菌微生物学步骤 第 1 部门：产品上微生物总数的测定》
《中国药典》2020 年版四部 1105 非无菌产品微生物限度查抄：微生物计数法
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